git tag | Atlassian Git Tutorial
Использование тегов
В этом документе описываются концепция использования тегов в Git и команда git tag
. Теги — это ссылки, указывающие на определенные точки в истории Git. Команда git tag обычно используется для захвата некой точки в истории, которая используется для релиза нумерованной версии (например, v1.0.1). Теги похожи на неизменяемые ветки, но они, в отличие от веток, не имеют истории коммитов после создания. Подробнее о ветках см. на странице, посвященной git branch
. В этом документе описываются различные виды тегов, способы их создания, просмотра, удаления, предоставления доступа к ним и многое другое.
Создание тега
Для создания нового тега выполните следующую команду:
git tag <tagname>
Замените семантическим идентификатором состояния репозитория на момент создания тега. Стандартный шаблон для указания номеров версий выглядит как
git tag v1.4
.
Аннотируемые теги
Аннотируемые теги хранятся в базе данных Git в виде полных объектов. Напомним, в них находятся дополнительные метаданные, такие как имя создателя тега, адрес электронной почты и дата. Аналогично комментариям к коммитам существуют комментарии к аннотируемым тегам. Кроме того, для обеспечения безопасности аннотируемые теги можно подписывать и проверять с помощью GNU Privacy Guard (GPG).
Рекомендуется использовать аннотированные, а не облегченные теги, чтобы иметь доступ ко всем связанным метаданным.git tag -a v1.4
При выполнении этой команды будет создан аннотируемый тег с идентификатором v1.4
. Затем команда откроет настроенный текстовый редактор по умолчанию, чтобы запросить ввод дальнейших метаданных.
git tag -a v1.4 -m "my version 1.4"
Эта команда аналогична предыдущей, однако в этой версии передаются параметр -m
и комментарий. Этот удобный способ похож на команду git commit -m
, так как с его помощью новый тег создается без открытия локального текстового редактора. Вместо этого применяется комментарий, переданный после параметра -m
.
Облегченные теги
git tag v1.4-lw
При выполнении этой команды создается облегченный тег с идентификатором v1.4-lw
. Облегченные теги создаются, когда не используются параметры -a
, -s
или -m
. Этот тип тегов создает новую контрольную сумму тега и сохраняет ее в каталоге .git/
репозитория проекта.
Просмотр тегов
Чтобы просмотреть список сохраненных в репозитории тегов, выполните следующую команду.
git tag
Она выведет список тегов:
v0.10.0
v0.10.0-rc1
v0.11.0
v0.11.0-rc1
v0.11.1
v0.11.2
v0.12.0
v0.12.0-rc1
v0.12.1
v0.12.2
v0.13.0
v0.13.0-rc1
v0.13.0-rc2
Чтобы уточнить список тегов, можно передать параметр -l
и выражение с подстановочными знаками:
$ git tag -l *-rc*
v0.10.0-rc1
v0.11.0-rc1
v0.12.0-rc1
v0.13.0-rc1
v0.13.0-rc2
v0.14.0-rc1
v0.9.0-rc1
v15.0.0-rc.1
v15.0.0-rc.2
v15.4.0-rc.3
В указанном выше примере используются параметр -l
и выражение с подстановочными знаками -rc
, возвращающее список всех тегов с префиксом -rc
, который обычно используется для обозначения предвыпускных релизов.
Применение тегов к старым коммитам
В предыдущих примерах использования тегов демонстрируются операции без указания коммита. По умолчанию команда git tag
создает тег для коммита, на который ссылается указатель HEAD
. Вместо этого в git tag
можно передать ссылку на конкретный коммит. В этом случае тег будет создан для указанного коммита, а не для коммита, на который ссылается указатель HEAD
. Чтобы просмотреть список предыдущих коммитов, запустите команду
.
$ git log --pretty=oneline
15027957951b64cf874c3557a0f3547bd83b3ff6 Merge branch 'feature'
a6b4c97498bd301d84096da251c98a07c7723e65 add update method for thing
0d52aaab4479697da7686c15f77a3d64d9165190 one more thing
6d52a271eda8725415634dd79daabbc4d9b6008e Merge branch 'experiment'
При выполнении команды git log
будет выведен список коммитов. В этом примере мы создадим тег для самого верхнего коммита Merge branch 'feature'
. Нам понадобится ссылка на SHA-хеш коммита, который мы передадим Git:
git tag -a v1.2 15027957951b64cf874c3557a0f3547bd83b3ff6
При выполнении приведенной выше команды git tag
будет создан аннотируемый тег с идентификатором v1.2
для коммита, который мы выбрали в предыдущем примере с командой git log
.
Переназначение тегов. Замена старых тегов
Если вы попытаетесь создать тег с таким же идентификатором, как у существующего тега, Git выдаст ошибку, как показано ниже:
fatal: tag 'v0.4' already exists
Кроме того, если вы попытаетесь создать тег для старого коммита с существующим идентификатором тега, Git выдаст такую же ошибку.
Если вам необходимо обновить существующий тег, используйте параметр -f
(«force»).
git tag -a -f v1.4 15027957951b64cf874c3557a0f3547bd83b3ff6
Указанная выше команда сопоставит коммит 15027957951b64cf874c3557a0f3547bd83b3ff6
с идентификатором тега v1. 4
и переопределит любой существующий контент для тега v1.4
.
Публикация: отправка тегов в удаленный репозиторий
Публикация тегов похожа на отправку веток. По умолчанию команда
не отправляет теги. Их необходимо указать в команде git push
явным образом.
$ git push origin v1.4
Counting objects: 14, done.
Delta compression using up to 8 threads.
Compressing objects: 100% (12/12), done.
Writing objects: 100% (14/14), 2.05 KiB | 0 bytes/s, done.
Total 14 (delta 3), reused 0 (delta 0)
To [email protected]:atlasbro/gittagdocs.git
* [new tag] v1.4 -> v1.4
Для одновременной отправки сразу нескольких тегов необходимо указать в команде git push
параметр --tags
. Когда другие пользователи будут клонировать репозиторий или выполнять для репозитория команду pull, они получат новые теги.
Переключение тегов
Вы можете просмотреть состояние репозитория по тегу с помощью команды git checkout
.
git checkout v1.4
Указанная выше команда выполнит переход к тегу v1.4
. При этом репозиторий перейдет в состояние открепленного указателя HEAD
. Это значит, что любые внесенные изменения не будут добавлены в этот тег. Они попадут в новый открепленный коммит, который не будет принадлежать ни к какой ветке, и перейти на него можно будет только напрямую по SHA-хешу этого коммита. Поэтому рекомендуется создавать новую ветку каждый раз, когда вы вносите изменения, находясь в состоянии открепленного указателя HEAD
.
Удаление тегов
Удаление тегов — довольно простая операция. Чтобы удалить определенный тег, передайте команде git tag
параметр -d
и идентификатор этого тега.
$ git tag
v1
v2
v3
$ git tag -d v1
$ git tag
v2
v3
В этом примере при выполнении команды git tag
отобразился список тегов: v1, v2, v3. Затем была запущена команда
, которая удалила тег v1.
Резюме
Итак, теги — это дополнительный механизм для создания снимков состояния репозитория Git. Обычно теги используются для создания семантических идентификаторов номера версии, которые соответствуют циклам релизов программного обеспечения. Для создания, изменения и удаления тегов используется команда git tag
. Существует два типа тегов: аннотируемые и облегченные. Обычно рекомендуется использовать аннотируемые теги, поскольку в них хранятся дополнительные важные метаданные об этом теге. В этом документе также упоминаются другие команды Git — git push
и git checkout
. Более подробную информацию об их использовании см. на соответствующих страницах.
Видеовход | 8 Каналов (12В питание от регистратора) |
Тип Видеовхода | AHD (1280×720, 1920×1080), 960H |
АУДИО | |
Аудиовход | 8 каналов |
Сжатие аудио | G.711 |
ВИДЕО | |
Разрешение видеозаписи | AHD 1280×720, 1920×1080 |
Скорость записи на канал | 12.5 к/сек (1280×720), 6.25 к/сек (1920×1080) |
Режимы записи | Постоянная запись Запись по событию (G-датчик, тревожная кнопка, тревога) Непрерывная + Запись по событию |
Пред/Пост запись | По событию предзапись 5~1 сек, постзапись 1час~10 сек Постоянная запись длительная запись на HDD |
Сжатие | H. 264 |
GNSS | |
GPS / ГЛОНАСС | Поддержка GPS / ГЛОНАСС Частота обмена данными 1 Гц CEP ≤2.5 м Точность измерения скорости ≤0.1 м/сек TIFF в течение 1 минуты после загрузки |
ДАТЧИКИ | |
G-датчик | Диапазон измерений -2G — +2G Чувствительность 1024 LSB/g 3х мерный Частота обмена данными 100 Гц Точность ±140 mg |
Гиродатчик | 3х мерный Частота обмена данными 100 Гц Диапазон измерений ±1250/сек Чувствительность 262.4 LSB/0 /сек |
ВСТРОЕННЫЕ ЧАСЫ | |
RTC | Внутренняя батарейка |
ЗВУК | |
Зуммер | Ошибка, Обновление внутреннего ПО, Подтверждение загрузки |
ХРАНЕНИЕ | |
Основное | 2. 5” HDD или SSD (до 2 Тб) |
SD-карта | До 32ГБ |
ОРГАНЫ УПРАВЛЕНИЯ | |
Светодиоды | 5 шт (красный, оранжевый, синий, зеленый, красно-зеленый) |
Кнопки | 10 шт. |
СВЯЗЬ | |
Типы USB | USB 3G/4G или Wi-Fi модуль (опция) |
API | Поддержка DMS5 API |
Видеовыходы | 2 CVBS |
СОЕДИНЕНИЕ | |
Тревожный вход | 8 |
Релейный выход | 2 |
Вход данных от автомобиля | Поворот налево /направо, тормоз, движение назад, скорость, обороты двигателя, заряд аккумулятора |
ПРОГРАММНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ | |
Клиентское ПО | PC Viewer для Windows 7/8/10 |
ПО DMS Server | DMS5 Server для Windows 7/8/10 (опция) |
ПИТАНИЕ | |
Объявление языка в HTML
Объявление языка в HTMLВопрос
Как установить язык содержимого моей HTML страницы?
Краткий ответ
Всегда используйте языковой атрибут тэга html
для объявления языка по умолчанию на странице. Если страница содержит контент на другом языке, добавляйте языковой атрибут к элементам, окружающим этот контент.
Используйте lang
атрибут для HTML страниц и xml:lang
атрибут для страниц XML. Для XHTML 1.x и документов HTML5 Polyglot используйте оба атрибута вместе.
Используйте языковые тэги из IANA Language Subtag Registry. Вы можете найти тэги также с помощью Language Subtag Lookup.
Используйте вложенные элементы для того, чтобы позаботиться о контенте и значения атрибутов для одинаковых элементов на разных языках.
Детали
Основы
Всегда используйте языковой атрибут элемента html
. Он наследуется всеми другими элементами, и поэтому для текста в head
элементе документа будет задан язык по умолчанию.
Обратите внимание, что предпочтительнее использовать html
элемент, чем body
, так как body
элемент не включает в себя текст из head
элемента.
Если у вас есть какой-либо контент на странице, язык которого отличается от заданного в языковом атрибуте элемента html
, добавляйте языковые атрибуты к элементам окружающим такой контент. Это позволит вам отображать или обрабатывать его различным образом.
С некоторыми частями кода у вас могут возникнуть проблемы. Если у вас есть мультиязычный текст в элементе title
, вы не сможете разметить текст, содержащий разные языки, потому что title
атрибут поддерживает только символы, а не разметку.
То же самое относится к нескольким языкам в значениях атрибутов. На текущий момент эффективное решение этой проблемы отсутствует.
Выбор корректного атрибута
Если ваш документ HTML (то есть обрабатывается, как text/html
), используйте lang
атрибут для установки языка документа
или блока текста. Например, следующий код установит французский языком по умолчанию:
<html lang="fr">
Когда XHTML 1. x или страницы Polyglot обрабатываются, как text/html
, используйте оба атрибута lang
и xml:lang
вместе каждый раз, когда вы хотите объявить язык. Атрибут xml:lang
— это стандартный способ объявления языковой информации в XML. Убедитесь, что значения обоих атрибутов идентичны.
<html lang="fr" xml:lang="fr" xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml">
Атрибут xml:lang
не особо полезен для обработки HTML файлов, но он будет перекрывать значение lang
атрибута каждый раз, когда вы обрабатываете документ, как XML. Атрибут lang
разрешен синтаксисом XHTML и может быть распознан браузерами.
Однако, когда используются другие синтаксические анализаторы XML (например, функция lang()
в XSLT), вы не можете полагаться на то, что атрибут lang
будет распознан.
Если вы обрабатываете ваш документ, как XML (то есть используете MIME type application/xhtml+xml
), то
атрибут lang
не нужен, будет достаточно атрибута xml:lang
.
<html xml:lang="fr" xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml">
Что, если содержимое элемента и значения его атрибутов на разных языках?
Иногда язык текста в атрибутах и язык непосредственно контента элемента различаются. Например, в правом верхнем углу этой статьи расположен список ссылок на другие переводы данной страницы.
Текст ссылки отображает язык целевой страницы, но связанный title
атрибут содержит подсказку на языке текущей страницы:
Если ваш код выглядит, как указано ниже, то атрибут языка указывает, что испанский — не только язык контента, но и title
текста.
Это, очевидно, некорректно.
Некорректный код. Не копируйте!
<a lang="es" title="Spanish"
href="qa-html-language-declarations.es">Español</a>
Вместо этого, перенесите языковой атрибут в другой элемент, как показано в данном примере, в котором span
элемент наследует en
язык по умолчанию, установленный у html
элемента.
<span title="Spanish"><a lang="es"
href="qa-html-language-declarations.es">Español</a></span>
Что если нет подходящего элемента для того, чтобы прицепить атрибут языка?
Если вы хотите указать язык контента, но вокруг него нет никакой разметки, используйте такой элемент, как span
или div
.
Вот пример:
<p>You'd say that in Chinese as <span lang="zh-Hans">中国科学院文献情报中心</span>.</p>
Выбор значений языка
Чтобы быть уверенными, что юзер агенты распознают указанный вами язык, вам следует придерживаться стандартизированному подходу при указании значений атрибутов языка. Вам также необходимо подумать о том, как стандартизированно ссылаться на различные диалекты одного языка, например, такие, как американский и британский английский, которые существенно отличаются своим написанием и произношением.
Правила создания языковых атрибутов описываются IETF спецификацией, которая называется BCP 47. Помимо описания использования простых тэгов языка таких, как en
(английский) или fr
(французский), BCP 47 описывает,
как сочетать языковые тэги, что позволяет вам указывать региональные диалекты, скрипты и другие варианты, относящиеся к данному языку.
BCP 47 включает в себя, но выходит за рамки ISO списков кодов языков и стран. Чтобы найти подходящий код, вам нужно обратиться к IANA Language Subtag Registry.
Неофициальная утилита Language Subtag Lookup предоставляет удобный фронтенд инструментарий для IANA registry.
Для краткого, но достаточно тщательного ознакомления с синтаксисом тэгов BCP 47, читайте Языковые тэги в HTML и XML. Если необходима помощь в выборе корректного языкового тэга из множества возможных тэгов и комбинаций, смотрите Выбор тэга языка.
Дополнительная информация
Указание метаданных о языке аудитории
Если вы хотите создать метаданные, описывающие скорее язык целевой аудитории страницы, чем язык определенной части текста, реализуйте это с помощью отправки сервером
информации в HTTP заголовке Content-Language
. Если ваша целевая аудитория говорит более, чем на одном языке, HTTP заголовок позволяет вам использовать список языков, разделённых запятыми.
Это пример HTTP заголовка, объявляющего ресурс смесью английского, хинди панджаби языков:
Content-Language: en, hi, pa
Обратите внимание, что этот подход не сработает, если страница загружается с жесткого диска, CD или другого источника, не являющегося сервером. В настоящее время нет широко распространенного способа использования таких метаданных внутри страницы.
В прошлом многие люди использовали meta
элемент с атрибутом http-equiv
со значением Content-Language
. Из-за давних путаниц и непоследовательных реализаций этого элемента HTML5 спецификация сделала его несоответствующим стандартам HTML, так что вам больше не следует использовать этот элемент.
Для обратной совместимости, HTML5 описывает алгоритм, с помощью которого язык контента может быть определён из HTTP или meta
Content-Language
информации при определённых условиях. Как бы то ни было, это только запасной механизм для случаев, когда языковой атрибут отсутствует у html
тэга. Если вы используете атрибут языка для html
, что следует делать всегда, подобные запасные пути бесполезны.
Для подробной информации о Content-Language
в HTTP и meta
элементах читайте HTTP и meta для информации о языке.
Различные вещи, которые не относятся к делу
Вероятно, стоит упомянуть ещё несколько моментов, которые не имеют отношения к этой дискуссии.
Первое, невозможно объявить язык с помощью CSS.
Второе, DOCTYPE
, с которого должен начинаться любой HTML может содержать то, что выглядит для некоторых людей, как объявления языка. DOCTYPE
в примере ниже содержит текст EN, что означает ‘English’. Это, тем не менее, указывает на язык schema (схемы), связанной с данным документом – это никоим образом не указывает на непосредственно язык самого документа.
<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
Третье, иногда люди предполагают, что информация о естественном языке может быть получена из кодировки символов. Тем не менее, кодировка символов не позволяет однозначно идентифицировать естественный язык. Должно быть взаимно однозначное сопоставление между кодировкой и языком, чтобы это сработало, а его нет. Одна кодировка может быть использована многими языками, например Latin 1 (ISO-8859-1) используется и французским, и английским, а ещё многими другими языками. В дополнение, кодировка может отличаться в рамках одного языка, например арабский может использовать ‘Windows-1256’ или ‘ISO-8859-6’ или ‘UTF-8’.
Все эти примеры кодировок спорны, так как весь контент сегодня должен быть создан в UTF-8, который охватывает все, кроме самых редких, языки.
В некоторых текстах, таких, как арабский и иврит, отображаемый текст читается в основном справа налево, хотя числа и иностранные термины отображаются слева направо. Необходима разметка, такая, как dir
атрибут, для объявления right-to-left содержания. И в некоторых случаях разметка необходима для правильного отображения двунаправленного текста, но это невозможно сделать с помощью разметки языка.
То же самое относится к направлению текста. Как и в случае с кодировками, не всегда существует соответствие между языком и текстом, в том числе его направлением. Например, азербайджанский может быть записан справа налево (арабская письменность) и слева направо (латиница и кириллица), соответственно код языка az
может относится к обоим вариантам. Дополнительно, разметка направления текста применяет к тексту целый ряд различных значений, в то время, как язык является простым переключателем, который не соответствует поставленным задачам.
Дополнительные материалы
Приступаете к работе? Язык в Сети
руководство, Работа с языком в HTML
Ссылки по теме, Разработка HTML и CSS
- Язык
- Использование атрибутов для объявления языка
- Выбор значений языка
- Объявление изменений языка в документе
Что такое семантическая вёрстка и зачем она нужна — Блог HTML Academy
Давным-давно (лет пятнадцать назад) почти все делали сайты и не переживали о том, что под капотом. Верстали таблицами, использовали всё, что попадётся под руку (а попадались в основном div и span) и не особо заморачивались о доступности. А потом случился HTML5 и понеслось.
Семантическая вёрстка — подход к разметке, который опирается не на содержание сайта, а на смысловое предназначение каждого блока и логическую структуру документа. Даже в этой статье есть заголовки разных уровней — это помогает читателю выстроить в голове структуру документа. Так и на странице сайта — только читатели будут немного другими.
Почему семантика важна
Чтобы сделать сайт доступным. Зрячие пользователи могут без проблем с первого взгляда понять, где какая часть страницы находится — где заголовок, списки или изображения. Для незрячих или частично незрячих всё сложнее. Основной инструмент для просмотра сайтов не браузер, который отрисовывает страницу, а скринридер, который читает текст со страницы вслух.
Этот инструмент «зачитывает» содержимое страницы, и семантическая структура помогает ему лучше определять, какой сейчас блок, а пользователю понимать, о чём идёт речь. Таким образом семантическая разметка помогает большему количеству пользователей работать с вашим сайтом. Например, наличие заголовков помогает незрячим в навигации по странице. У скринридеров есть функция навигации по заголовкам, что ускоряет знакомство с информацией на сайте.
Чтобы сайт был выше в поисковиках. Поисковики не разглашают правила ранжирования, но известно, что наличие семантической разметки страниц помогает поисковым ботам лучше понимать, что находится на странице, и в зависимости от этого ранжировать сайты в поисковой выдаче.
Классический пример — расписание поезда «Сапсан» в выдаче Google.
Разработчики tutu.ru сверстали таблицу тегом table вместо div и их сниппет оказался в выдаче Google по важному коммерческому запросу.
Семантика прописана в стандартах. Многие разработчики по старинке пользуются конструкциями типа <div> для обозначения навигации или других структурных элементов страницы. Тем временем в стандарте HTML есть несколько семантических тегов, которые рекомендуется использовать для разметки страниц вместо <div>
и span
. В спецификации для каждого семантического элемента описана его роль.
Ну и представьте, насколько проще читать <nav></nav>
вместо <div></div>
. Или вот такой код. Смотрите и сразу понятно, что тут и зачем.
<!DOCTYPE html> <html lang="ru"> <head> <meta charset="utf-8"> <title>Заголовок страницы</title> </head> <body> <header> <!— Шапка сайта —> </header> <main> <!— Основное содержимое страницы —> </main> <footer> <!— Подвал сайта —> </footer> </body> </html>
Основные семантические теги HTML
Среди «старых» тегов из ранних версий HTML тоже есть семантические — например, тег <p>
, который обозначает параграф. При этом теги <i>
или <b>
не семантические, потому что они не добавляют смысла выделенному тексту, а просто определяют его внешний вид.
Но в актуальной версии стандарта HTML Living Standard есть семантические теги почти для всех основных частей сайта, и лучше пользоваться ими. Вот несколько примеров семантических тегов.
<article>
- Значение: независимая, отделяемая смысловая единица, например комментарий, твит, статья, виджет ВК и так далее.
- Особенности: желателен заголовок внутри.
- Типовые ошибки: путают с тегами
<section>
и<div>
.
<section>
- Значение: смысловой раздел документа. Неотделяемый, в отличие от <article>.
- Особенности: желателен заголовок внутри.
- Типовые ошибки: путают с тегами
<article>
и<div>
.
<aside>
- Значение: побочный, косвенный для страницы контент.
- Особенности: может иметь свой заголовок. Может встречаться несколько раз на странице.
- Типовые ошибки: считать
<aside>
тегом для «боковой панели» и размечать этим тегом основной контент, который связан с окружающими его элементами.
<nav>
- Значение: навигационный раздел со ссылками на другие страницы или другие части страниц.
- Особенности: используется для основной навигации, а не для всех групп ссылок. Основной является навигация или нет — на усмотрение верстальщика. Например, меню в подвале сайта можно не оборачивать в
<nav>
. В подвале обычно появляется краткий список ссылок (например, ссылка на главную, копирайт и условия) — это не является основной навигацией, семантически для такой информации предназначен<footer>
сам по себе. - Типовые ошибки: многие считают, что в
<nav>
может быть только список навигационных ссылок, но согласно спецификации там может быть навигация в любой форме.
<header>
- Значение: вводная часть смыслового раздела или всего сайта, обычно содержит подсказки и навигацию. Чаще всего повторяется на всех страницах сайта.
- Особенности: этих элементов может быть несколько на странице.
- Типовые ошибки: использовать только как шапку сайта.
<main>
- Значение: основное, не повторяющееся на других страницах, содержание страницы.
- Особенности: должен быть один на странице, исходя из определения.
- Типовые ошибки: включать в этот тег то, что повторяется на других страницах (навигацию, копирайты и так далее).
<footer>
- Значение: заключительная часть смыслового раздела или всего сайта, обычно содержит информацию об авторах, список литературы, копирайт и так далее. Чаще всего повторяется на всех страницах сайта.
- Особенности: этих элементов может быть несколько на странице. Тег
<footer>
не обязан находиться в конце раздела. - Типовые ошибки: использовать только как подвал сайта.
Как разметить страницу с точки зрения семантики
Процесс разметки можно разделить на несколько шагов с разной степенью детализации.
- Крупные смысловые блоки на каждой странице сайта. Теги:
<header>, <main>, <footer>
. - Крупные смысловые разделы в блоках. Теги:
<nav>, <section>, <article>, <aside>
. - Заголовок всего документа и заголовки смысловых разделов. Теги:
<h2>-<h6>
. - Мелкие элементы в смысловых разделах. Списки, таблицы, демо-материалы, параграфы и переносы, формы, цитаты, контактная информация и прогресс.
- Фразовые элементы. Изображения, ссылки, кнопки, видео, время и мелкие текстовые элементы.
Более подробно методика создания семантической разметки описана в навыке «Создание семантической разметки по макету» и профессиональных курсах HTML Academy.
Создание семантической разметки по макету
Навык, без которого фронтенд-разработчикам ну просто никуда.
Изучить
Сомневаюсь, какие теги использовать
Есть простые правила для выбора нужных тегов.
- Получилось найти самый подходящий смысловой тег — использовать его.
- Для потоковых контейнеров —
<div>
. - Для мелких фразовых элементов (слово или фраза) —
<span>
.
Правило для определения <article>, <section>
и <div>
:
- Можете дать имя разделу и вынести этот раздел на другой сайт? —
<article>
- Можете дать имя разделу, но вынести на другой сайт не можете? —
<section>
- Не можете дать имя? Получается что-то наподобие «новости и фотогалерея» или «правая колонка»? —
<div>
Как точно не нужно делать
Не используйте семантические теги для красоты. Для этого есть CSS.
Может показаться, что некоторые теги подходят для того, чтобы сделать страницу покрасивее, подвигать текст или добавить ему интервалов. Но то, что браузер по умолчанию отображает теги как-то, как вам нужно, не значит, что это нужно использовать. Посмотрим на пример.
Здесь сразу несколько ошибок:
- Тег
<blockquote>
должен использоваться для выделения в тексте цитат, а не просто случайного выделения текста. Так совпало, что в браузерах этот блок по умолчанию выделен, но это не значит, что нужно его использовать таким образом. - Тег
<ul>
тоже использован для визуального «сдвига» текста. Это неверно, потому что этот тег должен быть использован только для обозначения списков, а во-вторых, в тег<ul>
можно вкладывать только теги<li>
и ничего больше. - Тег
<p>
использован, чтобы визуально раздвинуть текст. На самом деле этот тег используется для выделения параграфов.
А любое выделение, сдвиг или иные превращения текста можно выполнить с помощью CSS.
Поэтому используйте семантические теги по назначению.
Ещё из рубрики «HTML»
Все научились программировать. А дальше-то что?
Ученье — свет.
Как работает каскад в CSS
А вы знаете?
Почему мы иногда пишем студентам первыми
Заинтриговало? Тогда ныряйте в статью.
Graffitimarket — Аэрозольная краска и маркеры для граффити и творчества
Flame Blue в России
120 матовых цветов
Подробнее
Molotow Artist
Маркеры и краски для художников
Подробнее
Molotow Acrylic-Twin
Один маркер для любых целей
Подробнее
Аэрозольная краска
Аэрозольная краска для любых целей
Маркеры
Широкий выбор инструментов для граффити и дизайнаЗаправки
Все самое необходимоеКультура
Узнавай большеВсе поступления
Новинка
Маркер Allcity пустой 10мм
Подробнее
Новинка
Маркер Allcity пустой 15мм
Подробнее
Новинка
Маркер Allcity пустой 30мм
Подробнее
Новинка
Маркер Allcity пустой 50мм
Подробнее
Новинка
Маркер Allcity сквизер Slim пустой 10мм
Подробнее
Новинка
Маркер Allcity сквизер пустой 10мм
Подробнее
Новинка
Маркер Allcity сквизер пустой 18мм
Подробнее
Новинка
Сумка Montana Red Bag
Подробнее
Новинка
Сумка Montana Logo + Stars белая
Подробнее
Новинка
Лак Angelus 4-Coat Acrylic Finisher 118мл
Подробнее
Новинка
Обезжириватель кожи Angelus 29.
5млПодробнее
Новинка
Лак Angelus 4-Coat Acrylic Finisher 29.5мл
Подробнее
Все новости
Molotow и Flame по новой цене!
Снижение цен
Подробнее
INFINITY — Граффити мультфильм (2022)
by Enderm
Подробнее
ALL CITY — новое имя в граффити
Хотели выгодный и надежный инструмент для теггинга?…
Подробнее
DOPE — большой завоз, снижение цен.
Мы рады сообщить о большой поставке и снижении цен…
Подробнее
Новинка FAT INK Oozy Dirt
Такого Вы еще не видели! Новинка от FAT INK меняет правила. ..
Подробнее
Все бренды
Arton
Многолетний опыт работы в изготовлении аэрозольных эмалей,…
Перейти в каталогFat&Skinny
Маркер Fat&Skinny — это новинка от компании…
Перейти в каталогFlame
Краски фирмы Flame выпускаются в Германии, где ценят высокое…
Перейти в каталогGraffitimarket
Наш магазин занимается не только продажей продукции для…
Перейти в каталогGrog
Фирма GROG родом из Италии. Инструменты этого бренда…
Перейти в каталогMolotow
Товары для граффити под брендом Molotow с каждым годом приобретают…
Перейти в каталогMontana
Montana — бренд крупнейшего немецкого производителя аэрозольных…
Перейти в каталогMtn
Впервые массовое производство аэрозольной. ..
Перейти в каталогOn the run
Название бренда происходит от «On the run», что…
Перейти в каталог119
Новинка
Аэрозольная краска Arton 400 мл
Подробнее
13
Новинка
Аэрозольная краска Arton 600 мл
Подробнее
Аэрозольная краска Montana Black 400 мл
Подробнее
Заправка 214 Ink Original черная 1000 мл
Подробнее
Лак акриловый Montana Varnish 400 мл
Подробнее
Акриловая заправка Molotow One4All 180 мл
Подробнее
Магазины
Москва Graffitimarket на Дмитровской
Адрес
ул. Новодмитровская 1, с.5 (Территория Хлебозавод №9)
Телефон
8(800) 707-25-45
Почта
График работы
ежедневно с 10.00 до 22.00
Москва Graffitimarket на Киевской
Адрес
м.Киевская(Кольцевая), ул.Брянская, д.2.
Телефон
8 (800) 707-25-45
Почта
График работы
ежедневно с 10.00 до 22.00
Москва Graffitimarket на Таганке
Адрес
ул. Верхняя Радищевская 9а, стр.1 (вход со двора)
Телефон
8 (800) 707-25-45
Почта
График работы
ежедневно с 10.00 до 22.00
Санкт-Петербург Graffitimarket на Сенной площади
Адрес
м. Садовая / Сенная площадь, ул. Ефимова, д.5
Телефон
+7 (812) 407-48-94
8 (800) 707-25-45
Почта
График работы
ежедневно с 10.00 до 22.00
Cанкт-Петербург Graffitimarket на Восстания
Адрес
Пл. Восстания, ул. 1я Советская д.6, корп. 2 (цокольный этаж)
Телефон
+7 (812) 981-70-91
8 (800) 707-25-45
Почта
График работы
ежедневно с 10.00 до 22.00
Все магазины
Скидочная программа
для постоянных клиентов
Оперативная и эффективная
обратная связь
Большой обновляющийся
выбор товаров
Бесплатная доставка
свыше 10 000 руб
Магазины в Москве
и Санкт-петербурге
Доставка во все
населенные пункты РФ
Как правильно писать теги и хештеги на YouTube — Маркетинг на vc.ru
Теги и хештеги — эффективный инструмент продвижения YoyTube-канала. Достаточно научиться их правильно расставлять, и результаты не заставят себя долго ждать. Однако прежде чем браться за расстановку, стоит разобраться, чем отличаются эти два термина и каковы правила их использования.
86 464 просмотров
Фото: pixabay. com
Разница между тегами и хештегами
Хештеги нужны для того, чтобы свести видео, связанные общей темой, но от разных авторов, в одну категорию. Так, хештег #созданиесайта выведет для вас все записи, так или иначе связанные с разработкой интернет-ресурсов.
Теги, они же ключевые слова, используются для выбора нужной информации в поисковых системах либо непосредственно в YouTube. Вводите нужное словосочетание в поисковую строку и получаете перечень ссылок соответствующей тематики.
Обратите внимание: при запросе по хештегам и по тегам выдача будет разной.
Работа с хештегами YouTube
Правила написания
Чтобы поисковые системы правильно идентифицировали хештеги и могли с ними работать, формулировка таких словосочетаний должна соответствовать требованиям:
- Хештег всегда начинается с #, иначе поисковик не поймёт, с чем имеет дело.
- Все слова пишутся слитно, без пробелов и знаков препинания.
- Не стоит использовать более трёх слов. Если формулировка слишком длинная, запутаются и пользователи, и поисковики.
Требования к хештегам
Если вы не хотите, чтобы ваше видео заблокировали, не нарушайте рекомендации и запреты YouTube.
- Хештеги должны соответствовать теме видео. Запрещается добавлять ложные сочетания, которые могут ввести пользователей в заблуждение.
- Оптимальное количество маркеров к одной записи — три, но если этого недостаточно, можно добавить ещё, однако не более 15.
- Нельзя применять в качестве хештегов обычные слова или повторяющиеся предложения.
- Категорически запрещено использовать оскорбительные, нецензурные или грубые слова и словосочетания, пропагандировать дискриминацию и насилие, выставлять хештеги сексуального характера.
Добавление хештегов
Чаще всего хештеги вписывают в момент загрузки видео, но можно сделать это и позднее. При добавлении надо помнить три важных момента:
- Хештег работает как гиперссылка, то есть при нажатии на него выдаётся список видео выбранной темы.
- Если его добавить в заголовок, то под видео ни он, ни другие отображаться не будут.
- При отсутствии хештега в заголовке, под роликом будут выведены три первых хештега из описания.
Порядок добавления будет выглядеть таким образом:
Надо войти в раздел «Творческая студия».
Навести курсор на выбранное видео, а затем нажать на появившийся значок карандаша.
В открывшемся окне под описанием видео добавляются хештеги.
Работа с тегами Youtube
Теги, они же ключевые слова, можно добавлять как к самому видео, так и к каналу, который нуждается в продвижении. В общей сложности длина тега может составлять до 500 символов. Не следует использовать слишком много ключевиков: система сочтёт это спамом и заблокирует видео.
Как добавить теги к видеоролику
Добавить теги к конкретному ролику просто — достаточно выполнить те же действия, что и при вписывании хештегов, только спуститься чуть ниже и вставить ключевики в окно тегов.
Как добавить теги к каналу на YouTube
С каналом дело обстоит чуть сложнее. Для начала надо войти в настройки.
После нажатия на «Настройки» откроется окно, в котором следует выбрать «Канал».
Если кликнуть на «Канал», откроется окно, где во вкладке «Основная информация» есть место для ключевых слов. После добавления тегов необходимо нажать кнопку «Сохранить» в правом нижнем углу.
Где брать теги для видео YouTube
Проще всего подобрать теги, используя бесплатный сервис Яндекс Wordstat. Для этого достаточно ввести в поисковую строку слово или словосочетание по теме видео. Вы получите перечень фраз, которые можно использовать в качестве ключевиков. Цифры показывают, как много пользователей вводили этот запрос за последний месяц.
Кроме этого, есть и другие ресурсы, помогающие найти нужные теги. Вот список самых популярных:
- VidIQ;
- TubeBuddy;
- Kparser;
- Keyword Tool;
- Prozavr.
Часть из них бесплатна, но большинство предлагают бесплатный сервис с ограничениями и более функциональный платный вариант.
Теги и хештеги — важный, хотя и не единственный инструмент продвижения видеороликов и собственных каналов. Используя его, можно основательно поднять в выдаче нужное видео.
Система dTAG для немедленной и целенаправленной деградации белков
- Артикул
- Опубликовано:
- Бехнам Набет ORCID: orcid. org/0000-0002-6738-4200 1,2 na1 ,
- Джастин М. Робертс ORCID: orcid.org/0000-0001-6112-7476 3 na1 ,
- Деннис Л. Бакли 3 na1 nAff6 ,
- Joshiawa Paulk 3 nAff6 ,
- Shiva Dastjerdi 3 ,
- Annan Yang 3 ,
- Alan L. Leggett 1 ,
- Michael А. Эрб Orcid: orcid.org/0000-0001-9993-3481 3 ,
- Matthew A. Lawlor 3 ,
- Amanda Souza 3 NAFF6 ,
- Thames G. Scott 3 , , ,
- .0004
- Sarah Vittori 3 ,
- Jennifer A. Perry 3 ,
- Jun Qi 1,4 ,
- Georg E. Winter 3 nAff7 ,
- Kwok-Kin Wong 5 ,
- Натаниэль С. Грей ORCID: orcid.org/0000-0001-5354-7403 1,2 и
- …
- Джеймс Э. Брэднер ORCID: orcid.org/0000-0002-2718-4415 3,4 nAff6
Природа Химия Биология том 14 , страницы 431–441 (2018)Процитировать эту статью
57 тыс. обращений
296 цитирований
147 Альтметрический
Сведения о показателях
Abstract
Вскрытие сложных биологических систем требует целенаправленного контроля функции или количества белков. Генетические возмущения ограничены нецелевыми эффектами, многокомпонентной сложностью и необратимостью. Наиболее ограничивающим фактором является необходимая задержка между модуляцией и экспериментальным измерением. Чтобы обеспечить немедленный и избирательный контроль количества отдельных белков, мы создали химико-биологическую систему, которая использует потенциал проницаемых для клеток гетеробифункциональных деструкторов. Система dTAG сочетает в себе новый деструктор FKBP12 F36V с экспрессией FKBP12 F36V в рамке считывания с интересующим белком. С помощью трансгенной экспрессии или CRISPR-опосредованного локус-специфического нокаута мы иллюстрируем обобщаемую стратегию изучения непосредственных последствий потери белка. Используя dTAG, мы наблюдаем неожиданно превосходящий антипролиферативный эффект деградации бромодомена pan-BET по сравнению с селективной деградацией BRD4, характеризуем немедленные эффекты потери KRAS G12V на протеомную передачу сигналов и демонстрируем быструю деградацию in vivo. Эта технологическая платформа обеспечит кинетическое разрешение для биологических исследований и обеспечит целевую проверку в контексте открытия лекарств.
У вашего института нет доступа к этой статье
Соответствующие статьи
Статьи открытого доступа со ссылками на эту статью.
Рекрутирование фактора сплайсинга в ядерную пластинку для его инактивации
- Карен Вестер
- , Марко Преуснер
- … Маркус С. Вал
Биология коммуникаций Открытый доступ 22 июля 2022 г.
Захват транскрипционных конденсатов эндогенными ретровирусами
- Вахид Асими
- , Абхишек Сампат Кумар
- … Денес Хниш
Природа Генетика Открытый доступ 21 июля 2022 г.
Антагонизм Polycomb-lamina разделяет гетерохроматин на периферии ядра
- Эллисон П. Зигенфельд
- , Шелби А. Роузман
- … Брайан Б. Ляу
Связь с природой Открытый доступ 20 июля 2022 г.
Варианты доступа
Подписаться на журнал
Получить полный доступ к журналу на 1 год
118,99 €
всего 9,92 € за номер
Подписаться
Расчет налогов будет завершен во время оформления заказа.
Купить статью
Получите ограниченный по времени или полный доступ к статье на ReadCube.
32,00 $
Купить
Все цены указаны без учета стоимости.
Рис. 1: Гетеробифункциональные молекулы dTAG взаимодействуют и димеризуют FKBP12 F36V и CRBN в биохимических анализах. Рис. 2: dTAG-7 и dTAG-13 избирательно разрушают FKBP12 F36V CRBN-зависимым образом в клетках. Рис. 3: Селективная фармакологическая деградация эндогенно меченого BRD4. Рис. 4: Быстрая деградация ядерных и цитоплазматических химер слияния FKBP12 F36V . Рис. 5: Деградация KRAS G12V быстро обращает нарушенную протеомную и транскрипционную сигнальную программу трансформированных клеток. Рис. 6: Оценка быстрой и обратимой деградации in vivo.Ссылки
Winter, G.E. et al. Конъюгация фталимида как стратегия деградации целевого белка in vivo. Наука 348 , 1376–1381 (2015).
КАС Статья Google ученый
Лу, Дж. и др. Взлом цереблона убиквитинлигазы E3 для эффективного нацеливания на BRD4. Хим. биол. 22 , 755–763 (2015).
КАС Статья Google ученый
Zengerle, M., Chan, K.H. & Ciulli, A. Селективная низкомолекулярная индуцированная деградация бромодоменного белка BET BRD4. АКС Хим. биол. 10 , 1770–1777 (2015).
КАС Статья Google ученый
Winter, G. E. et al. Бромодоменные белки BET функционируют как основные факторы элонгации транскрипции независимо от рекрутирования CDK9. Мол. Cell 67 , 5–18.e19 (2017).
КАС Статья Google ученый
Bondeson, D. P. et al. Каталитический нокдаун белка in vivo низкомолекулярными PROTAC. Нац. хим. биол. 11 , 611–617 (2015).
КАС Статья Google ученый
Remillard, D. et al. Деградация фактора комплекса BAF BRD9 гетеробифункциональными лигандами. Анжю. хим. Междунар. Эдн. англ. 56 , 5738–5743 (2017).
КАС Статья Google ученый
Bonger, K.M., Chen, L.C., Liu, C.W. & Wandless, T.J. Смещение малой молекулы скрытого дегрона вызывает условную деградацию белка. Нац. хим. биол. 7 , 531–537 (2011).
КАС Статья Google ученый
«>Buckley, D.L. et al. HaloPROTACS: использование низкомолекулярных PROTAC для индукции деградации слитых белков HaloTag. АКС Хим. биол. 10 , 1831–1837 (2015).
КАС Статья Google ученый
Chung, H.K. et al. Настраиваемый и обратимый медикаментозный контроль продукции белка с помощью саморасщепляющегося дегрона. Нац. хим. биол. 11 , 713–720 (2015).
КАС Статья Google ученый
Нисимура К., Фукагава Т., Такисава Х., Какимото Т. и Канемаки М. Дегроновая система на основе ауксина для быстрого истощения белков в нерастительных клетках. Нац. Методы 6 , 917–922 (2009).
КАС Статья Google ученый
Banaszynski, L.A., Chen, L.C., Maynard-Smith, L.A., Ooi, A.G. & Wandless, T.J. Быстрый, обратимый и настраиваемый метод регулирования функции белка в живых клетках с использованием синтетических малых молекул. Cell 126 , 995–1004 (2006).
КАС Статья Google ученый
Плечи, М. Д., Рино, Л. М., Кули, С. Б., Келли, Дж. В. и Уайзман, Р. Л. Широко применимая методология для быстрой и дозируемой регуляции факторов транскрипции с помощью малых молекул в клетках человека. Дж. Ам. хим. соц. 135 , 8129–8132 (2013).
КАС Статья Google ученый
Zhou, Q. et al. Подход химической генетики для функциональной оценки новых генов рака. Рак рез. 75 , 1949–1958 (2015).
КАС Статья Google ученый
Clackson, T. et al. Модернизация интерфейса FKBP-лиганд для создания химических димеризаторов с новой специфичностью. Проц. Натл. акад. науч. США 95 , 10437–10442 (1998).
КАС Статья Google ученый
Робертс, Дж. М. и Брэднер, Дж. Э. Анализ близости на основе шариков для обнаружения лиганда BRD4. Курс. Протокол. хим. биол. 7 , 263–278 (2015).
Артикул Google ученый
Дуглас, Э. Ф. мл., Миллер, С. Дж., Спэрер, Г., Шапиро, Х. и Шпигель, Д. А. Комплексная математическая модель для равновесия связывания трех тел. Дж. Ам. хим. соц. 135 , 6092–6099 (2013).
КАС Статья Google ученый
«>Krönke, J. et al. Леналидомид вызывает селективную деградацию IKZF1 и IKZF3 в клетках множественной миеломы. Наука 343 , 301–305 (2014).
Артикул Google ученый
Schneekloth, J. S. Jr. et al. Химический генетический контроль уровня белка: селективная целенаправленная деградация in vivo. Дж. Ам. хим. соц. 126 , 3748–3754 (2004).
КАС Статья Google ученый
Ананд, П. и др. Бромодомены BET опосредуют высвобождение транскрипционной паузы при сердечной недостаточности. Cell 154 , 569–582 (2013).
КАС Статья Google ученый
Брэднер, Дж. Э., Хниш, Д. и Янг, Р. А. Транскрипционная зависимость при раке. Cell 168 , 629–643 (2017).
КАС Статья Google ученый
Делмор, Дж. Э. и др. Ингибирование бромодомена BET как терапевтическая стратегия для нацеливания на c-Myc. Cell 146 , 904–917 (2011).
КАС Статья Google ученый
Дешпанде, А. Дж., Браднер, Дж. и Армстронг, С. А. Модификации хроматина как терапевтические мишени при лейкемии с реаранжировкой MLL. Тренды Иммунол. 33 , 563–570 (2012).
КАС Статья Google ученый
Ловен, Дж. и др. Селективное ингибирование опухолевых онкогенов путем разрушения суперэнхансеров. Cell 153 , 320–334 (2013).
Артикул Google ученый
Шорт Дж., Отт С. Дж., Джонстон Р. В. и Брэднер Дж. Э. Набор инструментов для химического зонда для анализа эпигенома рака. Нац. Преподобный Рак 17 , 160–183 (2017).
КАС Статья Google ученый
Филиппакопулос, П. и др. Селективное ингибирование бромодоменов BET. Природа 468 , 1067–1073 (2010).
КАС Статья Google ученый
Танака, М. и др. Дизайн и характеристика двухвалентных ингибиторов БЭТ. Нац. хим. биол. 12 , 1089–1096 (2016).
КАС Статья Google ученый
Сакума, Т., Накаде, С., Сакане, Ю., Сузуки, К. Т. и Ямамото, Т. Нокаут-ин генов с помощью MMEJ с использованием TALEN и CRISPR-Cas9 с системами PITCh. Нац. протокол 11 , 118–133 (2016).
КАС Статья Google ученый
Стивен, А. Г., Эспозито, Д., Баньи, Р. К. и Маккормик, Ф. Тащить Раса обратно на ринг. Раковая клетка 25 , 272–281 (2014).
КАС Статья Google ученый
Кокс, А.Д., Фесик, С.В., Киммельман, А.С., Луо, Дж. и Дер, С.Дж. Наркотики не поддающейся лечению РАС: миссия выполнима? Нац. Преподобный Друг Дисков. 13 , 828–851 (2014).
КАС Статья Google ученый
Ферамиско Дж. Р., Гросс М., Камата Т., Розенберг М. и Суит Р. В. Микроинъекция онкогенной формы человеческого белка H-ras (T-24) приводит к быстрой пролиферации покоящихся клеток . Cell 38 , 109–117 (1984).
КАС Статья Google ученый
Shih, C., Padhy, L.C., Murray, M. & Weinberg, R.A. Трансформирующие гены карцином и нейробластом, введенные в мышиные фибробласты. Природа 290 , 261–264 (1981).
КАС Статья Google ученый
Stacey, D.W. & Kung, HF. Трансформация клеток NIH 3T3 путем микроинъекции белка Ha-ras p21. Природа 310 , 508–511 (1984).
КАС Статья Google ученый
McAlister, G.C. et al. Увеличение мультиплексирующей способности ТМТ с использованием изотопологов репортерных ионов с изобарическими массами. Анал. хим. 84 , 7469–7478 (2012).
КАС Статья Google ученый
«>Erickson, B.K. et al. Оценка мультиплексного количественного анализа фосфопептидов на гибридном квадрупольном масс-фильтре/линейной ионной ловушке/масс-спектрометре с орбитальной ловушкой. Анал. хим. 87 , 1241–1249 (2015).
КАС Статья Google ученый
Смил, Т., Бинетруй, Б., Меркола, Д. А., Биррер, М. и Карин, М. Онкогенное и транскрипционное сотрудничество с Ha-Ras требует фосфорилирования c-Jun на серинах 63 и 73. Природа 354 , 494–496 (1991).
КАС Статья Google ученый
«>Chin, Y. R. & Toker, A. Белок, связывающий актин, палладин представляет собой Akt1-специфический субстрат, который регулирует миграцию клеток рака молочной железы. Мол. Cell 38 , 333–344 (2010).
КАС Статья Google ученый
Gilmartin, A.G. et al. GSK1120212 (JTP-74057) представляет собой ингибитор активности и активации MEK с благоприятными фармакокинеическими свойствами для устойчивого ингибирования пути in vivo. клин. Рак рез. 17 , 989–1000 (2011).
КАС Статья Google ученый
Роберт, К. и др. Улучшение общей выживаемости при меланоме при применении комбинации дабрафениба и траметиниба. Н. англ. Дж. Мед. 372 , 30–39 (2015).
Артикул Google ученый
Набет, Б. и др. Нарушение регуляции сигнальной оси Ras-Erk модулирует ландшафт энхансеров. Cell Rep. 12 , 13:00–13:13 (2015).
КАС Статья Google ученый
Нацумэ, Т., Киёмицу, Т., Сага, Ю. и Канемаки, М.Т. Быстрое истощение белка в клетках человека с помощью индуцируемой ауксином дегроновой метки с донорами короткой гомологии. Cell Rep. 15 , 210–218 (2016).
КАС Статья Google ученый
Weintraub, A.S. et al. YY1 является структурным регулятором петель энхансер-промотор. Cell 171 , 1573–1588.e28 (2017).
КАС Статья Google ученый
«>Schröder, S. et al. Двустороннее связывание с белком 4, содержащим бромдомен, высвобождает положительный фактор элонгации транскрипции b из неактивных рибонуклеопротеиновых комплексов. Дж. Биол. хим. 287 , 1090–1099 (2012).
Артикул Google ученый
Banaszynski, L.A., Sellmyer, M.A., Contag, C.H., Wandless, T.J. & Thorne, S.H. Химический контроль стабильности и функции белка у живых мышей. Нац. Мед. 14 , 1123–1127 (2008).
КАС Статья Google ученый
Erb, M. A. et al. Контроль транскрипции доменом ENL YEATS при остром лейкозе. Природа 543 , 270–274 (2017).
КАС Статья Google ученый
Huang, H. T. et al. MELK не является необходимым для пролиферации базальноподобных клеток рака молочной железы. eLife 6 , e26693 (2017).
Google ученый
Ян, X. и др. Общедоступная библиотека лентивирусной экспрессии ORF человека в масштабе генома. Нац. Методы 8 , 659–661 (2011).
КАС Статья Google ученый
Ран, Ф. А. и др. Геномная инженерия с использованием системы CRISPR-Cas9. Нац. протокол 8 , 2281–2308 (2013).
КАС Статья Google ученый
Trapnell, C. et al. Сборка транскриптов и количественная оценка с помощью RNA-seq выявляют неаннотированные транскрипты и переключение изоформ во время дифференцировки клеток. Нац. Биотехнолог. 28 , 511–515 (2010).
КАС Статья Google ученый
Ловен, Дж. и др. Пересматривая глобальный анализ экспрессии генов. Cell 151 , 476–482 (2012).
Артикул Google ученый
Субраманиан, А. и др. Анализ обогащения набора генов: основанный на знаниях подход к интерпретации профилей экспрессии всего генома. Проц. Натл. акад. науч. США 102 , 15545–15550 (2005 г.).
КАС Статья Google ученый
Неклеса Т.К. и др. Деградация слитых белков HaloTag, вызванная низкомолекулярным гидрофобным мечением. Нац. хим. биол. 7 , 538–543 (2011).
КАС Статья Google ученый
Лу, Г. и др. Лекарство от миеломы леналидомид способствует цереблонозависимому разрушению белков Ikaros. Наука 343 , 305–309 (2014).
КАС Статья Google ученый
McAlister, G.C. et al. MultiNotch MS3 обеспечивает точное, чувствительное и мультиплексное обнаружение дифференциальной экспрессии в протеомах линии раковых клеток. Анал. хим. 86 , 7150–7158 (2014).
КАС Статья Google ученый
Sears, R. et al. Множественные Ras-зависимые пути фосфорилирования регулируют стабильность белка Myc. Гены Дев . 14 , 2501–2514 (2000).
КАС Статья Google ученый
Bisgrove, D. A., Mahmoudi, T., Henklein, P. & Verdin, E. Консервативный P-TEFb-взаимодействующий домен BRD4 ингибирует транскрипцию ВИЧ. Проц. Натл. акад. науч. США 104 , 13690–13695 (2007 г.).
КАС Статья Google ученый
Скачать ссылки
Благодарности
Мы благодарим N. Kwiatkowski за критическое чтение рукописи, W. Kaelin за обмен ссылками на клеточные линии и плазмиды с двойной люциферазой (Институт рака Дана-Фарбер, pLL3. 7-EF1a-IRES-Gateway-nluc-2xHA -IRES2-fluc-hCL1-P2A-Puro), R. Kunz и Thermo Fisher Scientific Center for Multiplexed Proteomics при Гарвардской медицинской школе для количественной оценки протеомики и фосфопротеомики, а также S. Nabet, A. Aguirre, W. Hahn, и сотрудникам лабораторий Браднера и Грея за полезные обсуждения. Эта работа была поддержана постдокторской стипендией Американского онкологического общества PF-17-010-01-CDD (B.N.), Программой Клаудии Адамс Барр в области инновационных фундаментальных исследований рака (DLB), Фондом исследования рака Деймона Руньона DRG-219.6-14 (D.L.B.), а также щедрые благотворительные пожертвования от Центра исследований рака поджелудочной железы Хейла и Исследовательского фонда Кэтрин Л. и Стивена С. Пинарда.
Информация об авторе
Примечания автора
Dennis L. Buckley, Joshiawa Paulk, Amanda Souza и James E. Bradner
Текущий адрес: Novartis Institutes for BioMedical Research, Cambridge, MA 5 Georg, USA 7 900 Winter
Текущий адрес: CeMM- Исследовательский центр молекулярной медицины Австрийской академии наук, Вена, Австрия
Эти авторы внесли равный вклад: Бехнам Набет, Джастин М. Робертс, Деннис Л. Бакли.
Авторы и организации
Отделение биологии рака, Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс, США
Бехнам Набет, Алан Л. Леггетт, Джун Ки и Натаниэль С.9 100 9047 900 Биологическая химия и молекулярная фармакология, Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс, США
Бехнам Набет и Натаниэль С. Грей
Отделение медицинской онкологии, Институт рака Дана-Фарбер, Бостон, Массачусетс, США
Джастин М. Робертс, Деннис Л. Бакли, Джошиава Полк, Шива Дастджерди, Аннан Янг, Майкл А. Эрб, Мэтью А. Лоулор , Аманда Соуза, Томас Дж. Скотт, Сара Виттори, Дженнифер А. Перри, Джордж Э. Винтер и Джеймс Э. Брэднер
Медицинский факультет Гарвардской медицинской школы, Бостон, Массачусетс, США
Джун Ци и Джеймс Э. Bradner
Онкологический центр Лауры и Исаака Перлмуттер, Медицинский центр Лангоне Нью-Йоркского университета, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, США
Квок-Кин Вонг
Авторы
- Бехнам Набет
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Justin M. Roberts
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Dennis L. Buckley
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия
- Джошиава Полк
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Shiva Dastjerdi
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Аннан Ян
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Alan L. Leggett
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Michael A. Erb
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Matthew A. Lawlor
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Аманда Соуза
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Thomas G. Scott
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Sarah Vittori
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Jennifer A. Perry
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Jun Qi
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Georg E. Winter
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- Kwok-Kin Wong
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Академия
- Nathanael S. Gray
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
- James E. Bradner
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Contributions
B.N., J.M.R. и D.L.B. задумал и провел исследование под руководством N.S.G. и ДЖ.Э.Б. Д.Л.Б. и С.Д. спроектировал и осуществил синтез молекул. Дж.М.Р. сконструировали лентивирусную и нокаутную векторные системы. Б.Н. и Дж.М.Р. разработали и провели нок-ин BRD4 и целевые панельные исследования. Б.Н. разработаны и выполнены исследования KRAS. Дж.М.Р. и JP разработали и провели анализы AlphaScreen и анализы двойной люциферазы IKZF1. С.В. и Г.Э.В. сконструировали векторы с двойной люциферазой FKBP12, а B.N., J.M.R. и S.V. проводил эксперименты с использованием этих систем. Б.Н. разработали и провели эксперименты по секвенированию РНК, а Б.Н., М.А.Е. и М.А.Л. провел биоинформатический анализ. Б.Н., А.Ю., А.С., К.-К.В. разработали и провели исследования на мышах. ВСЕ. и Т.Г.С. помогал в клеточных экспериментах. J.A.P. предоставлены технические консультации и интерпретация данных. Дж.К. предоставил реагенты и технические консультации. Б.Н. и ДЖ.Э.Б. написал рукопись с участием всех авторов.
Авторы переписки
Переписка с Натаниэль С. Грей или Джеймс Э. Брэднер.
Декларации этики
Конкурирующие интересы
Авторы заявляют о следующих конкурирующих финансовых интересах: Международные патентные заявки №№ PCT/US2016/039048, PCT/US2016/046087, PCT/US2016/046088, PCT/US2016/046089, каждая поданная от имени Dana-Farber Cancer Institute, Inc. D.L.B., J.P. и A.S. сейчас являются сотрудниками Novartis. G.E.W. является консультантом C4 Therapeutics. Н.С.Г. является научным учредителем и членом Научно-консультативного совета компаний Syros Pharmaceuticals, C4 Therapeutics и Petra Pharmaceuticals, а также изобретателем интеллектуальной собственности, лицензированной для этих организаций. ДЖ.Э.Б. является научным основателем компаний Syros Pharmaceuticals, SHAPE Pharmaceuticals, Acetylon Pharmaceuticals, Tensha Therapeutics (теперь Roche) и C4 Therapeutics, а также изобретателем интеллектуальной собственности, лицензированной для этих организаций. ДЖ.Э.Б. в настоящее время является исполнительным директором и акционером Novartis AG.
Дополнительная информация
Примечание издателя: Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и принадлежности к организациям.
Дополнительная информация
Дополнительный текст и рисунки
Дополнительная таблица 1–6, Дополнительные рисунки 1–15
. dTAG-13, dTAG-48, dTAG-51, био-SLF, био-Thal
Дополнительный набор данных 1
Полный список нормализованных и масштабированных количественных данных протеомики, основанных на масс-спектрометрии. Для клеток NIH/3T3, экспрессирующих FKBP12 F36V -KRAS G12V , обработанных ДМСО, 1 мкМ dTAG-13 в течение одного часа и 1 мкМ dTAG-13, представлены тройные значения из биологически независимых образцов нормализованного процента относительного содержания белков. на четыре часа.
Дополнительный набор данных 2
Полный список нормализованных и масштабированных количественных данных масс-спектрометрии на основе фосфосерина/треонина. Для клеток NIH/3T3, экспрессирующих FKBP12 9, представлены тройные значения из биологически независимых образцов нормализованного процента относительного содержания количественно определенных фосфозитов.0012 F36V -KRAS G12V , обработанный ДМСО, 1 мкМ dTAG-13 в течение одного часа и 1 мкМ dTAG-13 в течение четырех часов.
Дополнительный набор данных 3
Полный список нормализованных и масштабированных количественных данных масс-спектрометрии на основе фосфотирозина. Для клеток NIH/3T3, экспрессирующих FKBP12 F36V -KRAS G12V , обработанных ДМСО, 1 мкМ dTAG-13 в течение одного часа и 1 мкМ dTAG-13, представлены тройные значения из биологически независимых образцов нормализованного процентного относительного содержания фосфозитов. на четыре часа.
Дополнительный набор данных 4
Всплеск ERCC в нормированных значениях FPKM 200 верхних и 200 экспрессированных транскриптов с пониженной экспрессией при сравнении ложно трансдуцированных (контрольных) клеток NIH/3T3 или клеток NIH/3T3, экспрессирующих FKBP12 F36V -KRAS 120012 G обрабатывают ДМСО. Трехкратные значения FPKM из биологически независимых образцов представлены для контрольных клеток NIH/3T3, обработанных ДМСО, и клеток NIH/3T3, экспрессирующих FKBP12 F36V -KRAS G12V , обработанных ДМСО, 1 мкМ dTAG-13 или 10 нМ траметиниба. Набор данных сопровождает тепловую карту на рис. 5c.
Права и разрешения
Перепечатка и разрешения
Об этой статье
Дополнительная литература
Нацеливание на лизин-79-метилтрансферазу гистона h4 DOT1L при лейкозах с реаранжировкой MLL
- Ян И
- Шэнлей Гэ
Журнал гематологии и онкологии (2022)
Химеры, нацеленные на протеолиз (PROTAC), в терапии рака
- Синьи Ли
- Венчен Пу
- Юн Пэн
Молекулярный рак (2022)
Рекрутирование фактора сплайсинга в ядерную пластинку для его инактивации
- Карен Вестер
- Марко Пройснер
- Маркус С. Валь
Биология коммуникации (2022)
BRD2 разделяет доступный геном
- Лянци Се
- Пэн Донг
- Чжэ Лю
Природа Генетика (2022)
Целевые белковые деструкторы PROTAC: прошлое — это пролог
- Миклош Бекеш
- Дэвид Р. Лэнгли
- Крейг М. Крюс
Nature Reviews Drug Discovery (2022)
dTAG — платформа деградации белка для целевой проверки
Что такое dTAG?
dTAG (TAG деградации) — это инновационный подход к целевой проверке с использованием гетеробифункциональных низкомолекулярных деструкторов для использования системы клеточной деградации белка и удаления интересующего белка. Система dTAG, разработанная доктором Бехнамом Набетом и его коллегами из Онкологического центра Даны Фарбер, представляет собой универсальный подход и форму целевой деградации белка (TPD). Другие подходы TPD, такие как PROTAC 9Деструкторы 0012 ® MZ 1 (кат. № 6154) и THAL SNS 032 (кат. № 6532) используют существующий лиганд для интересующего белка, связанный с лигандом лигазы E3, при разработке деструктора. Технология dTAG устраняет необходимость в известном лиганде, объединяя технологию Degrader с инженерией генома.
Как работает dTAG?
Рисунок 1: Механизм действия dTAG
Целевой белок экспрессируется в виде химеры с мутантным FKBP12 F36V либо с помощью CRISPR/Cas9-опосредованная экспрессия локус-специфического нокаута или лентивирусного трансгена. Соединение dTAG, например, dTAG-13 (кат. № 6605) состоит из лиганда лигазы E3, связанного с высокоселективным лигандом FKBP12 F36V , которые образуют тройной комплекс между слитым белком и лигазой E3, вызывая полиубиквитинирование и деградацию целевого белка.
In vitro , dTAG-13, как было показано, приводит к быстрой и мощной деградации BRD4-FKBP12 F36V без влияния на эндогенные уровни FKBP12, BRD2 или BRD3 дикого типа. Для проверки этого метода система dTAG также была применена к белковым химерам FKBP12 9.0012 F36V в сочетании с ЭЖ3, HDAC1, КРАС, MYC и ПЛК1. Эффективность dTAG-13 также была продемонстрирована in vivo с использованием химеры люцифераза-FKBP12 F36V . Слитый белок был сначала экспрессирован в линии клеток лейкемии человека, а затем пересажен в костный мозг мышей. Обработка dTAG-13 приводила к быстрому снижению сигнала биолюминесценции, что указывает на эффективную деградацию люциферазы-FKBP12 химеры F36V .
Традиционные стратегии проверки мишени включают нарушение экспрессии генов и, следовательно, уровней общего клеточного белка с помощью РНК-интерференции (РНКи) или CRISPR/Cas9или ингибирование функции белка с помощью низкомолекулярных антагонистов. Фармакологические подходы, такие как малые молекулы, предлагают ряд преимуществ по сравнению с чисто генетическими методами, включая дозозависимые эффекты, а также быстрое и обратимое действие. Напротив, генетические подходы предлагают менее динамичный контроль, не позволяют титровать величину эффекта и чаще всего полностью необратимы. Использование dTAG для проверки мишени сочетает в себе ключевые преимущества генетических и фармакологических стратегий, обеспечивая быстрое и дозозависимое воздействие на общее содержание клеточного белка, которое обратимо при вымывании разрушителя.
dTAG-13 использовался для идентификации и проверки новых мишеней при раке. Белок ENL, содержащий домен YEATS, является частью комплекса суперэлонгации (SEC), который управляет активностью генов на уровне транскрипционной элонгации за счет увеличения каталитической скорости РНК-полимеразы во время транскрипции. Этот белок был ранее идентифицирован при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ) как ключевой белок, который поддерживает патогенез посредством поддержания нарушенной экспрессии генов, однако для ЭНЛ нет известных лигандов.
Чтобы подтвердить ENL в качестве цели в AML, Erb et al . экспрессировали ENL в виде слитого белка FKBP12 F36V в клеточной линии ОМЛ человека и продемонстрировали селективную деградацию ENL с наномолярными концентрациями dTAG-13. Это приводило к подавлению инициации и элонгации транскрипции по всему геному, а также к остановке клеточного роста. Дальнейшее исследование с использованием dTAG-13 для деградации ENL показало его роль в рекрутировании SEC и идентифицировало домен YEATS как считыватель хроматина, который необходим для ENL-зависимого роста клеток.
PROTAC ® является зарегистрированным товарным знаком Arvinas Operations, Inc. и используется по лицензии.
dTAG получил высокую оценку CiteAb Awards 2020!
Платформа деградации белка dTAG получила высокую оценку в номинации «Инновационный продукт года». В этой категории отмечены реагенты или инструменты, которые призваны изменить отрасль.
Ссылки
Эрб и др. . (2017)Контроль транскрипции доменом ENL YEATS при остром лейкозе. Природа. 543 , 270. PMID: 28241139
Mayor-Ruiz & Winter (2019) Идентификация и характеристика уязвимости к раку посредством целенаправленной деградации белка. Препарат Дисков Сегодня Технол. 31 , 81. PMID: 31200863
Набет и др. . (2018)Система dTAG для немедленной и целевой деградации белка. Nat Chem Biol. 14 , 431. PMID: 29581585
Категории блога:
Новые продукты
Направленная деградация белка
Рак
Теги:
Рак
Целевая деградация белка (TPD)
dTAG
Целевая проверка
TAG Деградация | aTAG, dTAG, BromoTAG
Наши технологии деградации TAG (dTAG, aTAG и BromoTag ® ) предлагают обобщаемую стратегию для деградации, в принципе, любого интересующего внутриклеточного белка. Ключевым преимуществом является то, что эти методы не зависят от наличия лиганда или PROTAC ® для интересующего белка. Платформа деградации TAG является полезной альтернативой методам генетического нокдауна/нокаута для проверки мишени и может использоваться в культуре клеток или в естественных условиях . Самым последним дополнением к нашей линейке продуктов TAG Degraders является BromoTag, эксклюзивная лицензия Университета Данди.
Посмотреть продукты dTAG, aTAG и BromoTag
Зачем использовать деструкторы TAG?Деградаторы dTAG, aTAG и BromoTag можно использовать для проверки и исследования мишеней, предлагая привлекательную альтернативу генетическому нокдауну/нокауту. В таблице ниже представлено сравнение деградации ТАГ с широко используемыми генетическими методами, включая CRISPR/Cas9.и РНК-интерференция. Ключевые преимущества TAG-деструкторов включают возможность настройки степени нокдауна белка путем изменения дозы и более быстрое начало действия (кинетика) для изучения «быстрой биологии». Кроме того, деструкторы dTAG, aTAG и BromoTag можно вымыть из культуральной среды, обратив их действие. TAG-деградеры теоретически можно использовать ортогонально для нокдауна более чем одного целевого белка в клетке.
Сравнение деградации ТАГ с генетическими методами нокдауна белка
Возможность настройки дозы | Эффективность | Реверсивность | Кинетика | Селективность | |
---|---|---|---|---|---|
Платформы для разложения ТАГ (dTAG/aTAG/BromoTag) | *** | **** | **** | *** | **** |
Нокаут гена напр. CRISPR/Cas | * | **** | * | * | **** |
Нокдаун гена напр. РНКи | * | *** | * | * | **** |
Как работают деструкторы dTAG, aTAG и BromoTag?
Рисунок 1: Механизм действия деструкторов dTAG, aTAG и BromoTag.
Для всех различных платформ деградации TAG требуется, чтобы интересующий белок экспрессировался в виде слияния с белком TAG (также известным как метка degron) посредством трансгенной экспрессии или CRISPR-опосредованного локус-специфического включения (см. раздел ресурсов ниже). для пользовательских клеточных линий и протоколов с нокаутом TAG). Последующая обработка соответствующим TAG-деградером нацелена на деградацию всего слитого белка. Гетеробифункциональные TAG-деградеры опосредуют образование тройного комплекса между убиквитинлигазой E3, такой как белок cereblon (CRBN) или von Hippel Lindau (VHL), и белком слияния. Это приводит к полиубиквитинированию целевого белка и последующей деградации всего слитого белка протеасомой. Деструкторы dTAG, aTAG и BromoTag действуют каталитически, многократно привлекая и направляя убиквитинирование молекул-мишеней. Они проницаемы для клеток и подходят для применений in vitro 91 140 и 91 139 применений in vivo 91 140. Ключевое различие между технологиями dTAG, aTAG и BromoTag заключается в идентичности используемого белка TAG.
dTAG
Система dTAG (или TAG деградации) использует одноточечный мутант (F36V) в качестве домена TAG с соответствующими деструкторами, которые селективно рекрутируют FKBP12 F36V вместо FKBP12 дикого типа. Доступны деструкторы dTAG, рекрутирующие две разные лигазы E3: dTAG-13 (кат. № 6605) и dTAG-7 (кат. № 69).12) рекрутируют CRBN, в то время как dTAG V -1 (кат. № 6914) рекрутирует VHL. Доступен отрицательный контроль.
aTAG
Система aTAG (Achilles TAG) использует фермент MTh2 (гомолог MutT-1; NUDT1) в качестве degron TAG, который экспрессируется в виде слияния с интересующим белком. MTh2 используется в качестве ТАГ в этой системе, поскольку потеря этого белка не имеет известных фенотипических последствий. Разрушители aTAG, aTAG 2139 (кат. № 6970) и aTAG 4531 (кат. № 6971) представляют собой гетеробифункциональные молекулы, содержащие лиганд, селективный в отношении MTh2, связанный с лигандом CRBN (E3-лигаза), и вызывают сильное и быстрое расщепление слитого белка протеасомой.
BromoTag
В системе BromoTag метка degron представляет собой модифицированный бромодомен BET, Brd4 BD2 L387A . Деградатор BromoTag ® AGB1 (кат. № 7686) привлекает модифицированный слитый белок Brd4 BD2 L387A для убиквитинирования лигазами VHL E3, что приводит к его быстрой протеасомной деградации. BromoTag ® AGB1 обладает высокой селективностью в отношении Brd4 BD2 L387A по сравнению с Brd4 дикого типа. Технология BromoTag предоставляется компанией Bio-Techne по эксклюзивному соглашению с Университетом Данди (Великобритания).
PROTAC ® является зарегистрированным товарным знаком Arvinas Operations, Inc. и используется по лицензии.
BromoTag ® является зарегистрированным товарным знаком Университета Данди и используется по лицензии.
Связанные ресурсы
Проверка целевых показателей деградации белка с использованием технического документа dTAG
Рецензируемый исследовательский документ: Разработка системы деградации AchillesTAG и ее применение для контроля активности CAR-T
Посетите сайт Tocris компании Bio-Techne, чтобы ознакомиться с протоколом CRISPR-опосредованного специфического нок-ина белков слияния MTh2 опосредованное введение FKBP12 F36V
Брошюра о целевой деградации белка
Каталожные номера
Бенсимон, A и др. (2020) Направленная деградация транспортеров SLC выявляет склонность мультипроходных трансмембранных белков к индуцированному лигандом протеолизу. Cell Chem.Biol. PMID: 32386596.
Бонд и др. (2021) Разработка BromoTag: система PROTAC типа «удар-и-дырка» для индукции мощной, быстрой и селективной деградации меченых белков-мишеней. Дж. Мед. хим. PMID: 34652918.
Набет, Б и др. (2020) Быстрый и прямой контроль уровня белка-мишени с помощью молекул dTAG, рекрутирующих VHL. Нац. коммун. PMID: 32948771.
Набет, Б и др. (2018) Система dTAG для немедленной и целенаправленной деградации белка. Нац. хим. биол. PMID: 29581585.
Этот пост был написан приглашенным блоггером Бехнамом Набетом, постдокторантом Института рака Дана-Фарбер.
Направленная деградация белков
В лабораториях Брэднера и Грея мы синтезируем соединения, которые позволяют избирательно удалять интересующие белки из протеома. Вместо того, чтобы ингибировать функцию белка, эти так называемые «маломолекулярные разрушители» задействуют протеасомы для разрушения белков-мишеней. Ранее мы разработали низкомолекулярные разрушители, которые обеспечивают селективную деградацию эндогенных белков (в частности, BRD2/3/4, CDK9, TRIM24, FLT3, BTK и ALK), связывая небольшие молекулы, которые связывают эти белки-мишени, с другими небольшими молекулами, которые связывают лигазу E3. Эти бифункциональные деструкторы кооптируют лигазы E3, такие как cereblon (CRBN) или von Hippel-Lindau (VHL), чтобы приблизить эндогенный механизм деградации к целевому белку, что приводит к полиубиквитинированию целевого белка и протеасомной деградации. Примечательно, что низкомолекулярные разрушители обладают явными преимуществами по сравнению с фармакологическими ингибиторами, включая быстрое истощение интересующего белка, повышение избирательности мишени, преодоление устойчивости к ингибиторам и индукцию пролонгированных биологических эффектов.
В то время как целевая деградация эндогенных белков является захватывающей стратегией, трудно применить эту технику к онкобелкам, в которых отсутствуют селективные связывающие низкомолекулярные соединения. Чтобы преодолеть это ограничение, мы создали обобщаемую стратегию на основе меток, которую мы называем системой меток деградации (dTAG), для кооптации эндогенного убиквитинового протеасомного механизма для деградации любого белка. Мы особенно рады системе dTAG, поскольку можем использовать ее для оценки эффектов быстрой и селективной деградации белков-мишеней в масштабах времени, которые невозможны при использовании традиционных генетических подходов. Кроме того, система dTAG универсальна и может использоваться как в клеточных анализах, так и в мышиных моделях.
Система dTAG
Система dTAG объединяет высокоселективные низкомолекулярные деструкторы FKBP12 F36V (молекула dTAG) и экспрессию белков, меченных FKBP12 F36V . Молекула dTAG индуцирует образование тройного комплекса между слиянием FKBP12 F36V и убиквитиновым протеасомным механизмом посредством связывания с цереблоном, что приводит к быстрой деградации мишени (рис. 1).
Плазмиды: Мы создали серию плазмид, которые можно приобрести в компании Addgene. Эти плазмиды обеспечивают лентивирусную экспрессию FKBP12 9 на N- или C-конце.0012 F36V меченые слитые химеры или локус-специфический нокаут FKBP12 F36V . Подробные протоколы, описывающие использование этих плазмид, доступны здесь. В разделе «Методы» Nabet et al., Nature Chemical Biology дополнительно представлена подробная информация о процедурах клонирования, используемых для конструирования депонированных плазмид.
Молекулы: Мы синтезировали молекулы dTAG путем конъюгации CRBN-связывающего лиганда (талидомида) с FKBP12 F36V связывающим лигандом (орто-AP1867) с помощью различных химических линкеров. Нашей современной ведущей молекулой dTAG является dTAG-13 из-за ее немедленного действия, мощного действия лиганда, большой глубины деградации, абсолютной селективности, широкого применения для деградации мишеней в различных клеточных компартментах и in vivo полезность. Молекулы dTAG поступят в продажу в ближайшем будущем, и мы предоставим обновленную информацию с номерами поставщиков и каталожными номерами. Поскольку мы тем временем рады поделиться аликвотами dTAG-13, пожалуйста, направляйте свои запросы на молекулы dTAG и любые вопросы Бехнаму Набету (behnam_nabet@dfci. harvard.edu), Натаниэлю Грею ([email protected]), или Джей Брэднер ([email protected]).
Рекомендации по установке и запуску системы dTAG в вашей лаборатории
Подтверждение функциональности ваших гибридных химер
Для каждого интересующего белка важно определить, какой конец может вместить метку FKBP12 F36V без нарушения функции белка. Поиск литературы может помочь определить, какой конец подходит для маркировки. Однако, если неясно, какой конец следует пометить, лентивирусные плазмиды dTAG могут служить быстрым средством сравнения функциональности N- и C-концевых слияний и деградации в интересующей клеточной линии до начала экспериментов с нокаутом.
Проверка токсичности молекулы dTAG в новых клеточных линиях
Обработайте родительские клетки (или клетки, экспрессирующие контроль, например, FKBP12 F36V , меченный LACZ) молекулами dTAG в выбранном вами биологическом анализе, чтобы убедиться, что нет токсичность в дозах, используемых для оценки деградации интересующей химеры слияния FKBP12 F36V . В клеточных линиях, которые мы оценивали на сегодняшний день, мы наблюдали токсичность dTAG-13 практически без токсичности в дозах до 20 мкМ (см. рис. 3 и 5 в Nabet et al., 9).1139 Nature Chemical Biology , например).
Мониторинг нео-субстратов
Деструкторы низкомолекулярных соединений могут рекрутировать CRBN в нестандартные или «нео-субстраты». Мы рекомендуем оценить деградацию известных нео-субстратов головного мозга (IKZF1, IKZF3, GSPT1, ZFP91 и CK1a). Хотя экспрессия этих нео-субстратов головного мозга различается в разных условиях (например, IZKF1 и IZKF3 являются специфическими для клеточного типа транскрипционными факторами, играющими важную роль при множественной миеломе), важно обеспечить отсутствие деградации в вашем контексте. Рекомендуется иммуноблоттинг, в то время как эксперименты по количественной протеомике обеспечат наилучшее подтверждение селективности FKBP12 F36V Деградация слитной химеры. В клеточных линиях, которые мы оценивали на сегодняшний день, мы не наблюдали нецелевой деградации нео-субстрата с помощью dTAG-13.
Примеры экспериментов
См. наши недавние статьи, указанные ниже, в которых приведены примеры зависимости доза-реакция и зависимости от времени (Nabet et al., Erb et al., Huang et al., Weintraub et al.), эксперименты с вымыванием (Nabet et al. и Weintraub et al.), химические и генетические спасательные эксперименты (Nabet et al.), протеомика (Nabet et al., Erb et al., Huang et al.), исследования транскрипционного и эпигеномного профилирования (Nabet et al., Erb et al., Weintraub et al.), оценка функциональности гибридных химер (Nabet et al., Erb et al., Huang et al., Weintraub et al.), нок-ин (Nabet et al. и Weintraub et al. ) и in vivo исследований (Nabet et al.).
Бехнам Набет, доктор философии, научный сотрудник Института рака Дана-Фарбер. Он биолог-химик, заинтересованный в целенаправленной деградации белков, и ведущий автор недавней статьи, описывающей технологию dTAG. Следите за ним в твиттере @behnamnabet.
Ссылки
Nabet et al. Система dTAG для немедленной и целенаправленной деградации белка.. Природа Химия Биология . Май 2018 г. 14(5): 431-441. PubMed PMID: 29581585.
- Этот справочник содержит полное описание системы dTAG. Систему dTAG использовали для оценки деградации множественных белков, меченных FKBP12 F36V , с использованием нашей лентивирусной экспрессионной платформы, для оценки селективной деградации FKBP12 F36V -BRD4 с использованием CRISPR/Cas9-опосредованного нокаута, а также для оценки деградации in vivo. .
- Рекомендуемые молекулы: dTAG-7 и dTAG-13
Эрб и др. Контроль транскрипции доменом ENL YEATS при остром лейкозе. Природа . 9 марта 2017 г. 543(7644): 270-274. PMID в PubMed: 28241139. PMCID в PubMed Central: PMC5497220.
- Систему dTAG использовали для оценки деградации ENL. Линии клеток были сконструированы для экспрессии ENL-FKBP12 F36V , а эндогенный ENL был инактивирован с использованием редактирования генов CRISPR/Cas9.
- Рекомендуемые молекулы: dTAG-7 и dTAG-13
Хуанг и др. MELK не является необходимым для пролиферации базальноподобных клеток рака молочной железы. eLife . Сентябрь 2017 г. 6: e26693. PMID в PubMed: 28926338. PMCID в PubMed Central: PMC5605198.
- Систему dTAG использовали для оценки деградации MELK. Клеточные линии были сконструированы для экспрессии FKBP12 F36V -MELK, а эндогенный MELK был инактивирован с помощью редактирования гена CRISPR/Cas9.
- Рекомендуемые молекулы: dTAG-7, dTAG-13 и dTAG-47
Weintraub et al. YY1 является структурным регулятором петель энхансер-промотор. Сотовый . 14 декабря 2017 г. 171(7):1573-1588.e28 PubMed PMID: 2
77. PubMed Central PMCID: PMC5785279.
- Систему dTAG использовали для оценки деградации YY1. Клеточные линии были сконструированы для экспрессии YY1-FKBP12 F36V с использованием CRISPR/Cas9-опосредованного нокаута.
- Рекомендуемая молекула: dTAG-47
Дополнительные ресурсы в блоге Addgene
- Easi-CRISPR: создание моделей нокаута и условной мыши
- CRISPR 101: Cas9 Nickase Design and Homology Directed Repair
- Плазмиды для мечения эндогенных генов в клетках человека
Ресурсы на Addgene.org
- Просмотреть все плазмиды CRISPR
- Плазмиды CRISPR для мечения белков
- Найти проверенные гРНК
Темы: Другие плазмидные инструменты, Плазмиды
d — SVG: Масштабируемая векторная графика
Атрибут d
определяет путь для рисования.
Определение пути — это список команд пути, где каждая команда состоит из буквы команды и цифр, представляющих параметры команды. Команды подробно описаны ниже.
Этот атрибут можно использовать со следующими элементами SVG:
,
,
.
d
является атрибутом представления и, следовательно, может также использоваться как свойство CSS.
html, body, svg { высота: 100% }
Для <путь>
, d
— это строка, содержащая ряд команд пути, определяющих путь, который нужно нарисовать.
Значение | <строка> |
---|---|
Значение по умолчанию | нет |
Анимируемый | Да |
Предупреждение: Начиная с SVG2 <глиф>
устарел и не должен использоваться.
Для <глиф>
, d
— это строка, содержащая ряд команд пути, которые определяют форму контура глифа.
Значение | <строка> |
---|---|
Значение по умолчанию | нет |
Анимируемый | Да |
Примечание: Исходная точка (координата 0
, 0
) обычно является верхним левым углом контекста. Однако элемент
берет свое начало в нижний левый угол своего почтового ящика.
Предупреждение: Начиная с SVG2
устарел и не должен использоваться.
Для
, d
— это строка, содержащая ряд команд пути, которые определяют контурную форму глифа.
Значение | <строка> |
---|---|
Значение по умолчанию | нет |
Анимируемый | Да |
d
является атрибутом представления и, следовательно, может быть изменен с помощью CSS. Свойство принимает либо path(), либо none
.
В приведенном ниже примере показано, как вы можете применить новый путь при наведении курсора на элемент. Новый путь такой же, как и старый, но добавляет линию через сердце.
html, body, svg { высота: 100% } /* Этот путь отображается при наведении */ #svg_css_ex1: путь наведения { г: путь("M10,30 A20,20 0,0,1 50,30 A20,20 0,0,1 90,30 Q90,60 50,90 Q10,60 10,30 z M5,5 L90,90") }
Команды пути — это инструкции, определяющие путь, который нужно нарисовать. Каждая команда состоит из командной буквы и цифр, которые представляют параметры команды.
SVG определяет 6 типов команд пути, всего 20 команд:
- MoveTo:
M
,м
- LineTo:
L
,l
,H
,h
,V
,v
- Кубическая кривая Безье:
C
,c
,S
,s
- Квадратичная кривая Безье:
Q
,q
,T
,t
- Кривая эллиптической дуги:
A
,a
- ClosePath:
Z
,з
Примечание: Команды чувствительны к регистру . Команда верхнего регистра указывает абсолютные координаты, а команда нижнего регистра указывает координаты относительно текущей позиции.
Всегда можно указать отрицательное значение в качестве аргумента команды:
- отрицательные углы будут против часовой стрелки;
- абсолютные отрицательные значения x и y интерпретируются как отрицательные координаты;
- относительные отрицательные значения x перемещаются влево, а относительные отрицательные значения y перемещаются вверх.
Команды пути MoveTo
Инструкции MoveTo можно рассматривать как взятие инструмента для рисования и установку его в другом месте — другими словами, перемещение текущей точки ( P o ; { x или , и или }). Нет линии между P o и новая текущая точка ( P n ; { x n , y n 9 }).
Примеры
html,body,svg { height:100% }
Команды Path Path
Инструкции Lineto Нарисуйте прямую линию из точки ( P O ; { x O , y x O , y 8 o 8. ( P n ; { x n , y n }), на основе указанных параметров. Конечная точка ( P n ) затем становится текущей точкой 9 1140 для следующей команды ( P или ′ ).
Примеры
html,body,svg { height:100% }
w3.org/2000/svg"> <путь заполнить = "нет" штрих = "красный" д="М 10,10 л 90,90 В 10 В 50" /> <путь заполнить = "нет" штрих = "красный" д="М 110,10 л 80,80 в -80 ч -40" />
Кубическая кривая Безье
Кубическая кривая Безье — это определения гладких кривых с использованием четырех точек:
- начальная точка (текущая точка)
( P o = { x o , y o })
- конечная точка
( P n = { x n , y n })
- запуск контрольной точки г.
( P cs = { x cs , y cs }) (управляет кривизной вблизи начала кривой)
- конечная контрольная точка
( P вс = { x вс , у вс }) (управляет кривизной вблизи конца кривой)
После рисования конечная точка ( P n ) становится текущей точкой для следующей команды ( P или ′ ).
Примеры
html,body,svg { height:100% }
Квадратичная кривая Безье
Квадратичная кривая Безье — это определения гладких кривых с использованием трех точек:
- начальная точка (текущая точка) г.
P o = { x o , y o }
- конечная точка
P n = { x n , y n }
- пункт управления
P c = { x c , y c } (контролирует кривизну)
г.
После рисования конечная точка ( P n ) становится текущей точкой для следующей команды ( P o ′ ).
Примеры
html,body,svg { height:100% }
Кривая эллиптической дуги
Кривая эллиптической дуги — это кривые, определяемые как часть эллипса. Иногда проще нарисовать очень правильные кривые с помощью эллиптической дуги, чем с помощью кривой Безье.
Примеры
html,body,svg { height:100% }
ClosePath
ClosePath Инструкции рисуют прямую линию от текущей позиции до первой точки пути.
Команда | Параметры | Примечания |
---|---|---|
З,з | Закройте текущий подпуть, соединив последнюю точку пути с его начальная точка. Если две точки находятся в разных координатах, между этими двумя точками проводится прямая линия. |
Примечание: Внешний вид фигуры, закрытой с помощью ClosePath , может отличаться от формы, закрытой путем рисования линии в исходную точку с помощью одной из других команд, поскольку концы линии соединяются вместе (согласно к настройке stroke-linejoin
), а не просто размещаться в тех же координатах.
Примеры
html,body,svg { height:100% }
Specification |
---|
Scalable Vector Graphics (SVG) 1. 1 (Second Edition) # DProperty |
Scalable Vector Graphics (SVG) 1.1 (Second Edition) # GlyphElementDAttribute |
Масштабируемая векторная графика (SVG) 1.1 (Второе издание) # DAttribute |
Таблицы BCD загружаются только в браузере с включенным JavaScript. Включите JavaScript для просмотра данных.
Последнее изменение: , участниками MDN
Тайна пропавших без вести DTAG: биологи сокращают поиск по тегу, поскольку время истекает
Исследователь Шейла Торнтон из отдела рыболовства и океанов Канады ищет УКВ-сигналы от пропавшей метки в густом дыму лесных пожаров в сентябре. Позже она узнала, что метка проплыла мимо того же места недалеко от аэропорта Ванкувера около 12 часов назад. Фото предоставлено: Fisheries and Oceans Canada.
Отсутствующая метка ускользает от ученых, как ныряющая косатка. Ученый-исследователь Шейла Торнтон из Fisheries and Oceans Canada узнала, что она, должно быть, находилась в двух шагах от метки. Когда она направила свою антенну слежения на воду с волнолома возле аэропорта Ванкувера, она увидела, что она прошла всего за 12 часов до этого.
Рыболовство и океаны Канада в значительной степени финансирует международные исследования ночного поведения косаток. Канадская команда изучает животных северных косаток Канады, популяции косаток, которая в последние годы преуспела. Тем временем американские биологи помечают находящихся под угрозой исчезновения южных жителей, которые, напротив, борются и приходят в упадок.
Совместное исследование направлено на документирование поведения касаток в течение полных 24 часов. Это помогает исследователям понять, как и когда киты расходуют энергию и когда они кормятся. Это может помочь выявить, когда дополнительная защита может принести наибольшую пользу китам.
Сравнение двух популяций может быть показательным, но сопряжено с риском, сказал Торнтон, который возглавляет исследование косаток в DFO.
«Вывешивание бирки на ночь означает именно это — вы рискуете потерять бирку», — сказала она. По ее словам, каждая метка стоит много тысяч долларов, но также требует много часов планирования и исследований, которые вместе имеют гораздо большую ценность.
Команда, прикрепившая бирку к K37, назвала ее «хорошей палкой», потому что присоски прикрепились быстро и аккуратно. Это предоставило наилучшую возможность для полевого сезона задокументировать ночную активность южного жителя, сохранив его данные для последующей загрузки. Поэтому им пришлось вернуть его.
Американские ученые получили разрешение работать на воде и отслеживать косаток в Канаде. У них не было разрешения на посадку в Канаде из-за закрытия границ из-за COVID-19.пандемия. Поэтому они не могли подняться на большую высоту для поиска УКВ-радиосигнала метки на большем расстоянии.
На уровне моря УКВ-сигналы могут распространяться не более чем на километр или два.
Изображение
Присоски DTAG удержали его на косатке южного резидента K37 в сентябре. Акселерометр в метке отслеживает движение кита, а гидрофоны записывают звуки китов и океана. Фото: Джефф Фостер/NOAA FisheriesПеший туризм, скалолазание и переправа на пароме
Однако им очень помогли их коллеги из Британской Колумбии.
— Даже небольшое возвышение помогает, — сказал Торнтон. «На каждые 10 метров высоты вы можете значительно увеличить радиус действия».
По ее подсчетам, за 6 дней поисков она прошла пешком не менее 30 километров и проехала более 800 километров. Ей нужно было подняться на большую высоту, где она могла бы обнаружить радиосигнал метки на большем расстоянии. Она отправила одного члена команды на гондоле на высоту 2800 футов или 850 метров вверх по горе Граус на северной стороне Ванкувера. Она также отправила членов своей команды кататься на паромах Британской Колумбии с антеннами, которые выглядят так, как будто они из «Звездного пути». В большинстве дней дым от лесных пожаров был слишком густым для их собственных лодок слежения.
«Иногда вам кажется, что вы гоняетесь за своим хвостом», — сказал Торнтон. «Это были настоящие согласованные усилия с обеих сторон границы».
В какой-то момент радиосигнал пропал почти на 2 дня. Ученые подозревают, что антенны метки могли запутаться в водорослях. Тем временем тег продолжал двигаться. Они опасались, что он застрянет на обширных илистых отмелях у устья реки Фрейзер, где его будет почти невозможно найти.
«Как и весь 2020 год, этот тег продолжал сбивать нас с толку», — сказала биолог-исследователь Марла Холт из Северо-западного научного центра рыболовства NOAA.
Сужение возможностей
Каждое новое обнаружение УКВ-сигналов сужало приблизительную полосу моря Салиш, где плавала метка. Позже ученые обнаружат, что метка провела большую часть недели в Канаде. Затем течения понесли его на юг и запад обратно в воды США и в сторону открытого океана.
Утром 18 сентября, через семь дней после прикрепления метки к косатке, находящейся под угрозой исчезновения, группа направилась на север от Фрайдей-Харбор. Им нечего было делать, кроме отдаленных сигналов, которые слышались в Канаде. Иногда гудки скрещиваются, что свидетельствует о том, что сигнал может отражаться от близлежащего холма или утеса.
«Радиоотслеживание — это одна из тех вещей, которые наполовину являются искусством, а наполовину наукой, — сказал биолог Брэд Хэнсон.
Незадолго до того, как судно столкнулось с туманом у восточной стороны острова Уолдрон, Хэнсон включил УКВ-приемник. Все услышали звуковой сигнал. Тег был рядом. Тоны от приемника стали сильнее, а «конус обнаружения», представляющий собой полосу океана, откуда исходит сигнал, сузился.
Трое ученых на лодке наблюдали за черной антенной длиной в фут, поднимающейся из воды, когда они проходили мимо приливных скоплений обломков, водорослей и других обломков.
«Мы все искали», — сказала Кэндис Эммонс, научный сотрудник NOAA Fisheries, которая управляла лодкой. — Ты можешь пройти мимо него за секунду.
Исследователь Джефф Хоган впервые заметил квадратную фигуру на расстоянии от 60 до 80 ярдов. Он вытащил метку из воды той же сетью, которую биологи используют для сбора образцов добычи и фекалий. Команда быстро протерла присоски на предмет следов кожи касатки. Микробиологи научного центра изучат образцы на наличие микробов, которые могут повлиять на здоровье китов.
«Нам повезло, что у каждого было нужное оборудование в нужном месте, чтобы забрать его», — сказал Грег Шорр из отдела исследований морской экологии и телеметрии, который помогал в поисках.
Холт определил по данным на метке, что она оторвалась всего на час раньше, а это означает, что она записала ценные ночные данные, будучи прикрепленной к K37. Это было настолько ценно, как она надеялась.
«Я думаю, мы все хотели бы знать, почему это произошло», — сказала она.
Американские и канадские ученые подчеркнули, что они никогда бы не нашли метку без помощи своих партнеров из-за границы.